Abstract Paspalum notatum is a polymorphic species with two accepted varieties, according to the ploidy level. The ploidy level is closely related to the reproductive mode of this species. Usually, diploid cytotypes have sexual reproduction, and tetraploid cytotypes have an apomictic reproduction. Apomixis limits genetic recombination, hindering the development of new cultivars. The identification of sexual plants represents many possibilities in breeding programs. This study aimed to analyze the chromosome number in P. notatum accessions under agronomic evaluation. Ploidy level was determined in 25 accessions. Two ploidy levels were detected, resulting in 21 tetraploid and four diploid accessions. The four diploid accessions originate from Argentina and Uruguay, in a region close to the origin of Pensacola, which is a diploid sexual cultivar of P. notatum. These new diploid accessions may be useful in the development of breeding programs of Paspalum species.

ABSTRACT Trifolium polymorphum Poir. is an amphicarpic forage legume from southern Brazil, Uruguay, Argentina, Paraguay and Chile. Information on the genetic diversity of natural populations in natural grasslands in southern Brazil is limited. In order to increase the knowledge about this species, an analysis of the genetic diversity was carried out in 10 natural populations of T. polymorphum with the use of 20 microsatellite markers. The expected heterozygosity in T. polymorphum populations ranged from 0.40 to 0.43, with a mean of 0.42. A total of 193 alleles were detected with a mean of 9.3 alleles per locus and polymorphic information content (PIC) for these markers of 0.62 to 0.89 with a mean of 0.84.The grouping based on the Jaccard’s coefficient of similarity classified populations, regardless of their regions of origin, into two groups with a mean similarity coefficient of 0.32, reflecting the high genetic variability of the populations, especially those located in the Campanha phytogeographic region. This information on diversity can be used to plan future germplasm collection strategies for conservation purposes and also for the breeding of the species.

ABSTRACT The Paspalum genus includes several species that are important for livestock in Rio Grande do Sul, such as P. notatum and P. guenoarum, typical of native pastures of the Pampa biome. The aim of this study was to investigate forage production and chemical composition of four ecotypes of these species in relation to the cv. ‘Pensacola’ (P. notatum). Ecotypes of P. guenoarum (Azulão and Baio) and P. notatum (André da Rocha and Bagual) and the cv. ‘Pensacola’ were evaluated for two years, during which four cuts/year were made. The work was carried out under field conditions at the Agronomic Experimental Station of the Federal University of Rio Grande do Sul (30°05’S; 51°39’W), in a completely randomized design. P. guenoarum stood out for higher productivity and greater tolerance to cold; the Azulão ecotype showed more autumn production in relation to the other ecotypes. Crude protein content ranged from 14 (Baio) to 15% (‘Pensacola’); for neutral detergent fiber, the variation was 68 (Azulão) to 71% (‘Pensacola’) and for acid detergent fiber there was a variation of 38 (‘Pensacola’) to 43% (Baio). The data demonstrates the potential of native genotypes for use as cattle feeding in southern Brazil.

Abstract This study aimed to evaluate the genetic and cytological diversity and stability of 35 cherry tree accessions collected in Rio Grande do Sul. We used 15 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) molecular markers and performed cytological analysis and number count of anthers. Analyses of genetic diversity allowed the separation of accessions into four groups, resulting in an average of 8.93 bands per primer amplified, 7.89 polymorphic bands, 88.08% of polymorphism and 86% of genetic similarity. Cytological analyses of gametic cells allowed for the characterization of accessions as diploids with n=11. In these, the average of meiotic cells considered normal was 82.12%; average pollen viability was 92.44% and in vitro germination was 40.26%; the average number of anthers was 161.85 anthers/flowers. Therefore, the accessions evaluated showed high genetic similarity and cytological stability and can be used in commercial plantations or hybridizations.

Abstract The objective of this study was to identify polyploid plants from citrus rootstocks and to evaluate the influence of the genetic constitution and of the environment on the frequency of chromosome duplication. Populations obtained from rootstock seeds of Trifoliata [Poncirus trifoliate (L.) Raf], citrumelo 'Swingle' [C. paradise Macf. × P. trifoliate], citrange 'Troyer' [C. sinensis (L.) Osb. x P. trifoliate] and citranges Fepagro 'C13', 'C37' and 'C41' [C. sinensis (L.) Osb. cv. Pêra x P. trifoliata] were evaluated under field and greenhouse conditions. Flow cytometry analysis of 415 field plants and 435 greenhouse plants identified seven (1.69%) and 29 (6.67%) tetraploids, respectively. Differences in the number of tetraploid plants among genotypes and locations were observed in field progenies of 'C 37' (2.12%) and 'C 13' (2.04%) and in greenhouse progenies of 'C 13' (15.52%) and 'C 37' (6%). The frequency of autotetraploidization events in citrus rootstocks is common and appears to be associated to genetic constitution and environmental conditions.

Twenty eight natural populations of Trifolium riograndense Burkart, an important forage legume from native pastures of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, were evaluated for genetic diversity with eight Simple Sequences Repeats (SSR) markers. Chromosome numbers were also determined. The eight markers were polymorphic, with 35 alleles and an average of 4.37 alleles per locus, and Polymorphism Information Content (PIC) between 0.48 and 0.80. Group analysis based on Jaccard´s similarity coefficient separated the 28 accessions in nine groups, with an average genetic similarity of 0.44, indicating a high genetic variability among the populations. No evident relation between genetic distance and geographical origin was detected. The chromosome number of 2n=2x=16 was found in all populations, indicating lack of intraspecific variability for chromosome number in the species. This information on diversity can be used in conservation strategies as well as in genetic breeding programs of this species.

As plantas cítricas possuem ampla variação morfológica e citogenética. Neste contexto, análises dessas plantas podem auxiliar na identificação de materiais mais promissores para cruzamentos. Uma população de tangerineiras híbridas oriundas do cruzamento das tangerineiras 'Clementina Fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan.) e 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.) foi avaliada segundo características morfológicas, época de maturação, número cromossômico e viabilidade de pólen. Foi possível distinguir as 94 plantas da progênie e os genitores através dos dados morfológicos. Verificou-se uma alteração no período de maturação dos frutos nas plantas híbridas. Todas as plantas avaliadas são diplóides com um número cromossômico de 2n=18, bem como, alto grau de viabilidade de pólen, variando entre 79,0% e 98,1%.

Citrus plants show morphological and cytogenetic variability and these characteristics can be useful to identify the materials for hybridization. A population of hybrid tangerines, originated from the cross between 'Clementina Fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan.) as female and 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.) as male parents, was characterized using morphological traits, maturation period, chromosome number and pollen viability. It was possible to distinguish the 94 plants of the progeny and the parents by morphological traits. The time of fruit ripening of the hybrid extended from the beginning of April until the end of August. All plants analyzed are diploid with a chromosome number of 2n = 18 and presented high pollen viability, varying from 79.0% to 98.1%.

Várias espécies de Trifolium são extensivamente cultivadas como forragem ou adubo verde. Caracterizaram-se e estimaram-se, por meio de atributos morfológicos e agronômicos, a diversidade genética de populações naturais de T. riograndense, importante leguminosa forrageira nativa dos campos naturais do Rio Grande do Sul. Estatura e diâmetro das plantas, número de estolões primários e secundários, comprimento do estolão primário, número de nós por estolão, comprimento dos entrenós, diâmetro de estolão, área foliar, tamanho do pecíolo e produção de massa seca foram avaliados em 29 acessos. Os cinco primeiros atributos e a produção de massa seca foram avaliados duas vezes. Ampla variabilidade fenotípica foi observada para quase todas as características. Ocorreram correlações positivas entre tamanho do pecíolo e área foliar (r = 0,68), tamanho do pecíolo e estatura (0,63) na primeira avaliação, e comprimento do estolão e estatura (0,58), massa seca total e diâmetro da planta (0,61) e massa seca total e estatura (0,55) na segunda avaliação. Os dois acessos mais divergentes foram coletados na mesma região fisiográfica e os dois menos divergentes em regiões diferentes. O dendrograma de dissimilaridade genética separou quatro grupos. Acessos coletados em uma região onde T. riograndense é abundante pertenciam a diferentes grupos, o que realça a grande variabilidade dessa leguminosa forrageira nativa. A produção de massa seca no primeiro corte foi a característica que mais contribuiu (20,80%) para a divergência dos acessos, seguida pelo número de estolões secundários (12,30%), área foliar (11,07%), e número de nós por estolão (10,93%).

Several species of Trifolium are widely cultivated as forage for animals and green manure. This work aimed to characterize and estimate through morphological and agronomic traits the genetic diversity of natural populations of T. riograndense, an important forage legume from native pastures of the state of Rio Grande do Sul, Brazil. Plant height and diameter, number of primary and secondary stolons, stolon length, number of nodes per primary stolon, internode length, primary stolon diameter, leaf area, petiole length and dry matter production were analyzed in 29 accessions. The first five attributes and dry matter production were evaluated twice. A broad phenotypic variability was observed for almost all characteristics. Positive correlations occurred between petiole length and leaf area (r = 0.68), petiole length and plant height in the first evaluation (0.63), stolon length and plant height (0.58), total dry matter and plant diameter (0.61), and total dry matter and plant height in the second evaluation (0.55). The two most divergent accessions were collected in the same physiographic region and the two less divergent ones in different regions. A dissimilarity dendrogram separated four groups. Accessions collected in a region where T. riograndense is abundant were found to belong to different groups outlining the great variability of this native forage legume. Dry matter production in the first cut was the characteristic that most contributed (20.80%) to accessions divergence followed by number of secondary stolons (12.30%), leaf area (11.07%), and number of nodes per primary stolon (10.93%).

Os citros apresentam uma taxonomia muito complexa, principalmente com relação ao número de espécies que constituem o gênero Citrus e os gêneros afins. Genótipos classificados como espécies podem ter sido originados por hibridação interespecífica e preservados por meio da embrionia nucelar. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar uma população de tangerineiras híbridas oriundas do cruzamento das tangerineiras 'Clementina Fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan.), genitor feminino, e 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.), genitor masculino, utilizando marcadores do tipo microssatélites (SSR). Com 12 pares de primers, foi possível diferenciar 93 acessos do estudo e agrupar a F1 em indivíduos mais próximos do genitor feminino e do genitor masculino. O PIC (Conteúdo de Informação de Polimorfismo) dos primers variou de 0,27 a 0,65. Toda a progênie do cruzamento entre 'Clementina Fina' e 'Montenegrina' analisada neste estudo é híbrida, e os SSRs foram eficientes para identificar híbridos com maior similaridade genética em relação aos genitores, mostrando a existência de variabilidade genética entre as plantas da população estudada.

Citrus have a very complex taxonomy, especially considering the number of species included in genus Citrus and related genera. What is classified as a species may have originated by interespecific hybridization and preserved through nucellar embryony. This research aimed to characterize a population of hybrid tangerines, originated from the cross of 'Clementina Fina' (Citrus clementina Hort. ex Tan.) as female and 'Montenegrina' (Citrus deliciosa Ten.) as male parents, using microsatellite molecular makers. With 12 pairs of primers it was possible to differentiate 93 of the studied accessions and to group F1 individuals nearer to the male or to the female parent. The primers PIC (Polymorphism Information Content) ranged from 0.27 to 0.65. All the analyzed progeny between 'Clementina Fina' and 'Montenegrina' is hybrid, where SSR were efficient in identifying hybrids more similar to the genitors, showing genetic variability among plants of the studied population.

Paspalum nicorae Parodi é uma forrageira perene, apomítica, tetraplóide, nativa no Rio Grande do Sul, com tolerância ao pastejo e adaptada a solos arenosos e a secas moderadas. Como passo inicial para o melhoramento, uma caracterização morfológica considerando pilosidade da folha, cor da bainha, da folha e da nervura central, hábito de crescimento, altura da planta, número e comprimento de racemos, comprimento e largura da folha foi realizada em 53 acessos coletados no Rio Grande do Sul, Brasil, que são parte de um programa de melhoramento de espécies de Paspalum. Os resultados mostraram que 35,84% dos acessos tinham folhas completamente pilosas, 73,58% tinham bainha verde, 54,71% venação central esbranquiçada e 50,94% hábito decumbente. A cor da folha foi estimada por dois métodos, cartela de cores e colorímetro Os acessos foram classificados como 76,92% verdes, 13,45% amarelo esverdeados e 9,62% como verde acinzentados pelo primeiro, e 59,62% acinzentados, 32,69% amarelo acinzentados, 5,77% amarelos e 1,92% cinza escuros pelo segundo método. O comprimento do racemo variou de 9,40 a 1,30 cm, o número de racemos de um a seis (sendo que 48,73% dos acessos tinham quatro racemos), o comprimento e a largura da folha de 36,13 a 13,06 cm e 0,67 a 0,36 cm, respectivamente e a altura da planta de 115,70 a 29,00 cm. Portanto, grande variação morfológica foi detectada entre os acessos, sem relação com localização geográfica, mas indicando alta potencialidade de utilização em programas de melhoramento.

Paspalum nicorae Parodi is a perennial, apomictic tetraploid forage species, native in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, with grazing tolerance and adapted to sandy soils and moderate droughts. As a first step to future breeding, a morphological characterization regarding leaf hairiness, sheath, leaf and central venation color, growing habit, plant height, raceme number and length, and leaf length and width was performed in 53 accessions from Rio Grande do Sul that are part of a Paspalum species breeding program. 35.84% of the accessions had completely hairy leaves, 73.58% had green sheath, 54.71% whitish central venation, 50.94% decumbent habit. Leaf color was estimated by two methods, color chart and colorimeter. The accessions were classified as 76.92% green, 13.45% greenish yellow and 9.62% as grayish green by the first, and 59.62% grayish, 32.69% grayish yellow, 5.77% yellow and 1.92% dark grayish by the second method. Raceme length ranged from 9.40 to 1.30 cm, number of racemes from one to six (48.73% of the accessions had four racemes), leaf length and width from 36.13 to 13.06 cm and 0.67 to 0.36 cm, respectively, and plant height from 115.70 to 29.00 cm. Therefore, a large morphological variation among accessions was detected, with no relation to geographical location but indicating a high potential use in plant breeding programs.

Este trabalho foi desenvolvido para estimar a fertilidade do pólen e determinar o nível de ploidia em progênies dos cruzamentos da tangerineira 'Montenegrina' (C. deliciosa Ten.) com a tangerineira 'King' (C. nobilis Lour.) e com a laranjeira 'Caipira' (C. sinensis (L.) Osb.). As plantas, de pés-francos e com idade entre 11 e 12 anos, são mantidas na Estação Experimental Agronômica da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, em Eldorado do Sul. Avaliaram-se o nível de ploidia, através da contagem dos cromossomos em células em meiose, e a fertilidade do pólen, por coloração do pólen com carmim propiônico, em 2005 e 2006. Todos os híbridos avaliados são diplóides e a fertilidade de pólen variou de zero a 98%. C27 - híbrido de 'Montenegrina' x 'Caipira' - revelou-se praticamente estéril, e a fertilidade de C21, do mesmo cruzamento, é de 10%. A menor fertilidade observada no cruzamento da 'Montenegrina' x 'King' foi de 42%.

This work was performed to estimate pollen fertility and determinate the ploidy level of 11 to 12 years old progenies of crosses of 'Montenegrina' mandarin (Citrus deliciosa Ten.) with 'King' mandarin (C. nobilis Lour.) and with 'Caipira' sweet orange (C. sinensis (L.) Osb.) maintained at Estação Experimental Agronômica of UFRGS, in Eldorado do Sul, Brazil. The ploidy level was determined by chromosome countings in meiosis cells and pollen fertility evaluated by staining pollen grains with propionic carmine. All evaluated hybrids are diploid and pollen fertility varied from zero to 98%. C27, a hybrid 'Montenegrina' x 'Caipira', was found is sterile, and C21, from the same cross, showed 10 % fertility. The lowest observed fertility in the progeny 'Montenegrina' x 'King' was 42 %.

Muitas espécies do genus Paspalum L. são importantes forragens, devido à qualidade, produtividade e tolerância para o stress ambiental. Números cromossômicos, configurações meióticas e fertilidade do pólen foram analisados em uma coleção de 85 acessos de Paspalum notatum Flügge e sete acessos de Pensacola (P. notatum var saurae). Todos os acessos de P. notatum eram tetraplóides, com 2n = 4x = 40, com exceção de um diplóide, considerado como escape de Pensacola. Todas as plantas de Pensacola examinadas tinham 2n = 2x = 20. Foi verificada variação entre os acessos tetraplóides quanto às configurações cromossômicas em diacinese e metáfase I, desde plantas com apenas bivalentes até aquelas com alta freqüência de quadrivalentes. A fertilidade do pólen variou de 82,5 a 95,9% entre os acessos diplóides e de 72,4 a 97,9% entre os tetraplóides. Devido ao modo de reprodução apomítico de P. notatum tetraplóide, irregularidades meióticas podem ser mantidas sem prejuízo da propagação. Ao mesmo tempo, a fertilidade do pólen deve ser suficientemente alta para assegurar a formação do endosperma, já que a espécie é pseudogâmica. Diplóides silvestres de P. notatum, além do endêmico P. notatum var saurae são muito raros. Do ponto de vista do melhoramento, todos os tetraplóides são potencialmente macho-férteis e poderiam ser utilizados como genitores masculinos em cruzamentos.

Several species of the genus Paspalum L. are important forages, due their to quality, productivity and tolerance to environmental stresses. Chromosome numbers, meiotic configurations and pollen fertility were evaluated in a collection of 85 accessions of Paspalum notatum Flügge and in seven accessions of Pensacola (P. notatum var saurae). All P. notatum accessions were tetraploid, with 2n = 4x = 40, except one diploid accession, considered as an escape of Pensacola. All Pensacola plants had 2n = 2x = 20. Meiotic configurations at diakinesis and metaphase I varied among tetraploid accessions, from plants with only bivalents to plants with high frequency of quadrivalents. Pollen fertility varied from 82.5 to 95.9% among diploid accessions and from 72.4 to 97.9% among the tetraploids. Due to the apomictic mode of reproduction of tetraploid P. notatum, meiotic irregularities can be maintained by plants without harming their propagation. At the same time, pollen fertility should be high enough to assure endosperm development, since the species is pseudogamous. Wild diploid P. notatum populations, apart from the endemic P. notatum var saurae, are very rare. From a plant breeding point of view, all the examined tetraploid accessions are potentially male-fertile and could be used as males in crosses.

Objetivou-se caracterizar a variabilidade existente e estimar a divergência genética de uma coleção nuclear de trevo-branco formada por 78 acessos. Dezessete plantas de cada acesso foram caracterizadas com base em nove parâmetros (oito morfológicos e um agronômico): estatura das plantas, hábito de crescimento, intensidade de florescimento, comprimento de estolão, número de nós por estolão, comprimento dos entrenós, diâmetro de estolão, produção total de MS e área foliar por planta. Pela estimativa da distância de Mahalanobis, os acessos 1 (PI 195534) e 10 (PI 419325) apresentaram a maior distância (45,4) e os acessos 58 (PI 180491) e 68 (PI 197830), a menor distância (0,19). A área foliar foi a característica com maior contribuição relativa para divergência genética (24%), seguida pela estatura da planta (20%), pela intensidade de florescimento (19%) e pela produção total de MS (15%). A análise de correlação linear simples entre as variáveis mostrou correlação positiva e significativa entre estatura e área foliar (0,92), assim como entre comprimento de estolão e comprimento de entrenós (0,90).

This work aimed to evaluate morphological features of the white clover core collection obtained from the United States Department of Agriculture (USDA), represented by 78 accessions, in order to characterize the existent morphological variability and to estimate the genetic divergence, using nine characters (eight morphological and one agronomic). Seventeen plants from each access were evaluated individually at the Experimental Station of the Universidade Federal do Rio Grande do Sul in Eldorado do Sul and characterized in relation to the following characters: plant height, growth habit, flowering intensity, stolon length, node number per stolon, internode length, stolon diameter, total dry matter yield and leaf area per plant. Using the estimate of Mahalanobis' distance, the results showed that the accessions 1 (PI 195534) and 10 (PI 419325) presented the greatest distance (45.4), while the accessions 58 (PI 180491) and 68 (PI 197830) presented the smallest distance (0.19). The leaf area was the character with the largest individual relative contribution to the genetic divergence (24%), followed by plant height (20%), flowering intensity (19%) and total dry matter yield (15%). There was a positive and highly significant correlation between plant height and leaf area (0.92) and also between stolon length and internode length (0.90).

Porque a poliploidização sexual amplia a base genética e proporciona aos melhoristas maior variabilidade para o processo de seleção, ela pode ser uma ferramenta útil ao melhoramento de trevo vermelho. Com o objetivo de obter plantas tetraplóides que possam ser utilizadas em programas de melhoramento de trevo vermelho, este trabalho relata resultados de três ciclos de cruzamentos, partindo de uma população parental de plantas tetraplóides de trevo vermelho, como genitores femininos, e de diplóides da cultivar Quiñiqueli, selecionados para produção de mais de 1% de grãos de pólen gigantes, como genitores masculinos. Nas outras gerações, os cruzamentos foram realizados por polinizações cruzadas mútuas. Quimerismo para número cromossômico e alta esterilidade de pólen foram detectados em F1 , F2 e F3, mas houve uma tendência para aumento da produção e viabilidade das sementes ao longo das gerações, provavelmente devido à competição bem sucedida entre gametas férteis e estéreis. A identificação de triplóides férteis, assim como sua formação recorrente ao longo das gerações, indica que o bloco triplóide não é completo em trevo vermelho e que triplóides podem ser utilizados com sucesso para a produção de poliplóides sexuais.

Because sexual polyploidization broadens genetic basis and supply plant breeders with more variability for the selection process, it can be useful in red clover breeding. This paper reports results of three crossing cycles, starting from a parental generation of tetraploid red clover plants (female parent), and diploids from the Quiñiqueli cultivar, selected for production of more than 1% of giant pollen grains (male parent) aiming to obtain tetraploid plants to be used in red clover breeding programs. Crosses in the next generations were performed by mutual cross-pollinations. Chromosome number chimerism and high pollen sterility were detected in F1, F2 and F3, but there was a trend towards increasing seed production and seed viability along the generations, probably due to successful competition between fertile and sterile gametes. The identification of fertile triploids, as well as their recurrent formation along the generations, indicates that triploid block is not complete in red clover, and that triploids may be successfully used as a bridge for the production of sexual polyploids.

Bromus auleticus é uma espécie perene, nativa do estado do Rio Grande do Sul, que tem demonstrado adaptabilidade, potencial para produção de forragem de qualidade e alta diversidade morfológica. Neste trabalho, foram analisados padrões de bandas de sistemas enzimáticos e de marcadores RAPD, com o objetivo de determinar a variabilidade genética em 16 acessos de Bromus auleticus do Rio Grande do Sul. A variabilidade foi avaliada pelo índice de similaridade de Jaccard, utilizando-se o método UPGMA nas análises de agrupamento. Os índices de similaridade variaram de 0,0 a 0, 50 com base em isoenzimas e de 0,15 a 0,71 com base em marcadores RAPD. Os dados foram eficientes para a formação de grupos, indicando a variabilidade genética dos acessos analisados. Entretanto, houve baixa relação entre os agrupamentos e os locais de coleta. A variabilidade genética dos acessos é importante sob o ponto de vista do melhoramento genético, permitindo a seleção futura dos genótipos a partir de seus respectivos desempenhos. A utilização simultânea de isoenzimas e RAPD foi eficiente na caracterização da diversidade genética dos acessos analisados.

Bromus auleticus is a perennial, native species of the state of Rio Grande do Sul, which has demonstrated adaptability, potential yield of good quality forage as well as high morphological diversity. This work has analyzed band patterns from enzymatic systems and RAPD markers, with the objective to access the genetic variability in 16 accessions of Bromus auleticus from Rio Grande do Sul. The variability was evaluated using Jaccard similarity index. The method of grouping based on the average (UPGMA) was used in cluster analyses. The similarity index ranged from 0.0 to 0.50 using isozumes and from 0.15 to 0.71 using RAPD markers. The data have been efficient for the formation of different groups, indicating the genetic variability of the accession analyzed. However, these groupings have little relationship with the respective collecting places. The genetic variability of the accessions is important to the genetic improvement, allowing future genotype selection based on their respective performances. The simultaneous utilization of isozymes and RAPD was efficient in characterizing the genetic diversity of the accessions evaluated.